PCR

Le laboratoire réalise différentes PCR pour les animaux de compagnie (chiens et chats) afin de détecter des modifications dans l'ADN cellulaire dans un but diagnostic en complément d'autres techniques (ex. test de clonalité pour la recherche d'éventuelles proliférations clonales de lymphocytes ; recherche d'une mutation du gène BRAF pour les cancers uro-prostatiques chez le chien), pour la mise en évidence de biomarqueurs pronostiques ou prédictifs (ex. recherche de mutations sur le gène CKIT chez le chien ou le chat).

La PCR et le séquençage

Quelles indications, pour quelles espèces :

La technique de PCR permet d'amplifier de courts segments connus d'ADN dans le but de vérifier la présence de ce fragment d'ADN dans l'échantillon et d'observer des anomalies de taille ou une prépondérance de certains segments amplifiés (amplicons). Si nécessaire, le séquençage va venir en complément de la PCR révéler précisément la présence de mutations dans les amplicons étudiés.

Ces techniques sont actuellement proposées dans les cas de figure suivants :

• Étude de la clonalité ou PARR (chien, chat, chevaux)
• Recherche de mutations sur le gène ckit (chien, chat)
• Recherche de la mutation V595E sur le gène BRAF (chien) par technique PCR avec combinaison amorces pour gène muté et amorce bloquante (sensibilité similaire à la dPCR, taux de mutation minimal pour détection 0.1‑1%)
• Recherche de mutations sur la région des exons 5-9 du gène TP53 (chien)
• Recherche de la mutation du gène MDR1 pour déterminer un éventuel risque sensibilité médicamenteuse (chien)
• D'autres développements sont possibles, après étude du besoin et réalisation d'un devis.

Quels échantillons avec quel mode de préservation tissulaire :

Plus la cellularité sera élevée et plus la PCR et le séquençage pourront donner un résultat. La richesse de l'échantillon est donc importante. Sa conservation est moins problématique que pour d'autres techniques, l'ADN étant stable. Les prélèvements sont transmis à température ambiante.

La recherche d'ADN anormal est faite sur échantillon frais. Le produit des ponctions d'organes ou masses sont transmis en tube sec. Les échantillons liquides tels que l'urine, le sang, les liquides d'épanchement, LCS sont transmis en tube EDTA.

La recherche d'ADN anormal est aussi possible sur lames de cytologie (déjà colorée voire montée), sur lames d'histologie (déjà montée), ou à partir de blocs d'histologie. Il convient de noter que la fixation tissulaire par le formol va réduire la qualité de l'ADN extrait.

Répétition et fréquence de réalisation de la technique au laboratoire :

La technique est réalisée sur simple demande. Elle peut être réalisée en urgence, à la demande, avec surcoût.

Histologie

Le laboratoire offre la préparation, la coloration et le montage de lames d’histologie à partir de blocs tissus inclus en paraffine, pour le diagnostic ou la recherche.

Une digitalisation des lames est possible grâce à un scanner de lames disponible sur site.

Immunohistochimie

Quelles indications, pour quelles espèces :

L’immunohistochimie vise à révéler la présence de protéines ou antigènes présents dans les tissus grâce à des anticorps spécifiques de ces antigènes.

Elle est utilisée dans les cas de figure suivants, les plus fréquents :

• Typer une tumeur indifférenciée (ex. mélanome achromique buccal chez le chien, tumeur cutanée à cellules rondes peu différenciée chez le chat, sarcoïde versus tumeur des gaines nerveuses chez le cheval, possible dans d’autres espèces animales en fonction de l’anticorps sur demande)
• Différencier entre une hyperplasie lymphoïde et un lymphome (chien, chat, cheval, furet)
• Typer un lymphome (chien, chat, cheval, furet)
• Étudier des marqueurs pronostiques ou prédictifs (ex. index de prolifération Ki67 chez le chien et le chat pour les mastocytomes, mélanomes et lymphomes)
• Rechercher la présence d’un agent pathogène (ex. Leishmanies chez le chien, coronavirus chez le chat et le furet)
• Évaluer le stress oxydatif dans les fibres musculaires striées (cheval) ou la dégénérescence neuronale dans l’intestin (cheval)

Il existe de nombreux cas de figure de typage de tumeurs indifférenciées : tumeurs à cellules rondes indifférenciées (lymphome, plasmocytome, mélanome, mastocytome, proliférations histiocytaires), sarcomes intestinaux (GIST vs autre sarcome), sarcomes spléniques (sarcome stromal vs sarcome histiocytaire), carcinome folliculaire thyroïde vs carcinome médullaire thyroïdien, etc. La liste des anticorps disponibles est mise à disposition sur demande.

Dans le cadre d’un lymphome, comme pour la cytométrie en flux, cette technique permet de déterminer s’il s’agit d’un type T ou d’un type B et d’établir le grade en fonction de l’activité proliférative des cellules. Les lymphomes de type T de haut grade sont rapportés avoir une durée de réponse plus courte à la chimiothérapie comparativement aux lymphomes de type B. Les lymphomes de type T de bas grade ne sont généralement pas traités de la même façon que les lymphomes de bas grade de type B.

D’autres indications pour d’autres espèces peuvent être envisagées après étude du besoin et réalisation d’un devis.

Quels échantillons avec quel mode de préservation tissulaire :

La technique d’immunohistochimie est réalisée à partir de prélèvements tissulaires. Les tissus ont été préalablement fixés au formol inclus et en blocs de paraffine. Il n’y a donc pas de contrainte de conservation.

Réception et fréquence de réalisation de la technique au laboratoire :

Les prélèvements sont réceptionnés du lundi au vendredi et la technique est réalisée deux fois par semaine.

Cytométrie en flux

Quelles indications pour quelles espèces :

Grâce à un ou plusieurs lasers, cette technique permet de déterminer la taille des cellules, leur granularité et également leur type à l’aide d’anticorps couplés à des fluorochromes spécifiques d’antigènes cellulaires.

Elle est utilisée dans plusieurs cas de figure :

• Différencier entre une hyperplasie lymphoïde et un lymphome (chien, chat)
• Typer un lymphome (chien, chat)
• Mettre en évidence un marqueur pronostique
• Diagnostiquer une leucémie chez le chien
• Différencier entre un thymome et un lymphome médiastinal (chien)

Dans le cadre d’un lymphome, elle permet de déterminer s’il s’agit d’un type T ou d’un type B et d’établir le grade en fonction de l’activité proliférative des cellules. Les lymphomes de type T de haut grade sont rapportés avoir une durée de réponse plus courte à la chimiothérapie comparativement aux lymphomes de type B. Les lymphomes de type T de bas grade ne sont généralement pas traités de la même façon que les lymphomes de bas grade de type B.

Dans le cadre d’une leucémie chez le chien, elle permet d’établir une origine lymphoïde ou myéloïde ou encore indifférenciée, à visée thérapeutique et pronostique (réponse thérapeutique plus favorable lors de leucémie lymphoïde aiguë avec des protocoles similaires à ceux du lymphome canin de haut grade).

Quels échantillons avec quel mode de préservation des cellules :

La cytométrie en flux caractérise les cellules en suspension dans un flux cellulaire qui va passer à travers un faisceau laser. Par conséquent, les échantillons doivent se présenter sous forme de liquides ou suspension de cellules.

Les différents types d’échantillons possibles sont :

• Sang, épanchements : à minima 1 ml, placés en tube EDTA. Si le délai d’acheminement est supérieur à 48 h, utiliser un tube Transfix (matériel fourni sur demande).
• Moëlle osseuse ou produit de ponction d’organes (ex. nœuds lymphatiques, rate). Le prélèvement doit être resuspendu dans 1 ml de sérum du chien (ou si non disponible, dans le sérum d’un autre patient canin). Si le délai d’acheminement est supérieur à 48 h, utiliser également un tube Transfix (matériel fourni sur demande).
• Ponction de liquide cérébro-spinal placé en tube EDTA ou idéalement dans un tube Transfix (matériel fourni sur demande). Néanmoins, la cellularité de ces échantillons est souvent trop faible pour permettre l’analyse par cytométrie en flux.

La cytométrie est utilisée en aide au diagnostic en complément d’autres techniques. En fonction du compartiment organique affecté, il conviendra de fournir l’un ou l’autre des éléments suivants :

• Un frottis sanguin, frottis de moëlle osseuse
• Étalement de produit de cytoponction pour les nœuds lymphatiques, organes, masses, épanchements
• Et/ou les rapports de cytologie, histopathologie, hématologie (numération formule récente)

Dans l’attente du transport, le prélèvement peut être réfrigéré (mais pas congelé).

Réception et fréquence de réalisation de la technique au laboratoire :

Les prélèvements sont réceptionnés du lundi au vendredi et traités quotidiennement ces jours‑là.

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